1、研究酶促反应动力学最重要的常数，数值等于酶促反应达到其最大速度Vm一半时的底物浓度〔S〕，可以表示酶和底物之间的亲和能力，Km值越大，亲和能力越弱，反之亦然。

2、判断酶与底物亲和力的大小。Km值小，表示用很低的底物浓度即可达到最大反应速度的一半，说明酶与底物亲和力大。可用1／Km近似地表示亲和力，1／Km愈大，酶与底物的亲和力愈大，酶促反应愈易进行。